Fiche d’activité n°5 (Saisir et mettre en relation des informations)
Interpréter le "smear" d’ADN génomique
1- Schématiser les résultats de l’électrophorèse des 3 témoins |
Témoin 1 : ADN viral non digéré |
2- Le génôme humain a une taille
d’environ 3 . 109 pb. Celle du virus utilisé, un phage lambda, est de 45
kb.
Quelle est la masse d’ADN contenue dan une cellule humaine et combien de cellules
sont utilisées pour l’extraction d’1 µg d’ADN génomique ? (masse
molaire moyenne d’un nucléotide : 330 g)
3- Quelle est la fréquence statistique théorique du site de restriction EcoR I (GGATTC : 6 pb) sur l’ADN génomique humain ?
4- En supposant que la digestion effectuée sur l’ADN génomique soit totale, pouvez vous expliquer la différence d’aspect entre les bandes nettes obtenues pour les fragments de restriction du marqueur et la tache diffuse (= « Smear ») obtenue pour l’ADN génomique digéré ?
5- Comment obtenir un résultat d’éléctrophorèse qui permettrait une étude de restriction précise d’un gène humain ?
Réponses attendues
2- 3.109 pb -> 6. 109
nucléotides -> 330 g x (6.109 /6,02.1023 ) moles de
nucléotides = 3,3.10-12 g d’ADN
1 µg d’ADN génomique -> 10-6 g / 3,3. 10-12 g/cellule =
3.107 cellules
3- probabilité de rencontre
d’un site de 6 nucléotides particuliers : 1/(4)6 = 1/ 4096
fréquence d’un tel site sur un ADN de 3. 109 pb : 3 . 109 /
4096 = 7,3. 105
4- Le « smear » est dû au mombre de fragments de restriction obtenus, 730 000 sur quelques centimètres, que l’électrophorèse n’a pu séparer.
5- en n’utilisant qu’un extrait du génome humain, chromosome, fragment de chromosome, gène isolé et cloné ...
