Préparation du Tampon TAE
Diluer 50 fois les 20 ml de solution mère pour obtenir 1 l de tampon TAE.
100 ml seront utilisés à la préparation du gel, le reste sera utilisé au remplissage
de la cuve à électrophorèse.
Ajouter, au dernier moment, 50 µl de BET à 1%, au litre de tampon obtenu.
Le BET, fluorescent aux U.V., se fixe sur l’ADN. Il permettra la lecture du gel sur la table à UV.
Utiliser des gants pour
toute manipulation du BET
Moulage du gel
Fondre 0,8g d’agarose dans 100 ml de tampon TAE additionné de BET,
au four micro-onde (2 à 3 min.) ou au bain marie à ébullition. Attendre la dissolution
de l’agarose : le gel devient translucide. Laisser refroidir jusqu’à 50-55 °C.
Couler les 100 ml de gel dans le plateau de moulage, disposé bien à plat et équipé de
peignes.
Ne jamais déposer de l’agarose à plus de 55 °C dans le plateau de moulage
(utiliser un thermomètre de contrôle).
Le peigne permet de marquer l’empreinte des puits de dépôt de l’ADN. Le gel ne
doit pas atteindre le sommet des dents du peigne. Laisser le gel se solidifier 15 min. à
température ambiante puis 15 min. au réfrigérateur. Laisser reposer 1 h. Retirer alors
délicatement et bien verticalement les peignes.
Placer le gel dans la cuve à électrophorèes, les puits disposés côté cathode.
Remplir la cuve avec le tampon TAE jusqu’à ce que le gel soit recouvert de quelques
mm de tampon.
