Mise en évidence de l'activation du complément
par hémagglutinationLes protéines du complément peuvent avoir une action
cytolytique qui est déclenchée par la formation du complexe immun. Le complément
sérique mis en présence d’hématies de mouton (GRM) sensibilisées par des Ac
antiGRM se fixe sur les Ac de ces complexes immuns et est activé, ce qui provoque la
formation d’un complexe d’attaque membranaire et donc l’hémolyse des GRM.
Cette manipulation montre le rôle de la formation du complexe immun dans la réaction
immunitaire et celui de son principal effecteur, le complément. |
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Déroulement de la séance
 | Durée
: manipulation 10 min, incubation 20 min., observation des résultats 10 min.
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| A préparer avant le TP
 | du tampon de Mayer : diluer 5 fois le tampon concentré fourni dans
de l’eau .
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| une solution de sérum hémolytique : diluer 25 µl de sérum titré
dans 10 ml de tampon de Mayer
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| une suspension d'hématies de mouton : diluer une suspension de GRM
50% de moitié dans du tampon de Mayer
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| une solution de complément : diluer au 1/20 du complément de cobaye
dans du tampon de Mayer
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Placer les réactifs tampon, sérum et complément à l’étuve
37°C.
| L'activité pratique des élèves
| Placer dans 4 puits d’une plaque de microtitration
 | dans le puits 1 : 37 µl de tampon
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| dans le puits 2 : 25 µl de sérum hémolytique antiGRM + 12µl de
tampon
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| dans le puits 3 : 12 µl de complément + 25 µl de tampon
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| dans le puits 4 : 25 µl de sérum hémolytique antiGRM + 12 µl de
complément
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| Rajouter dans chacun des 4 puits 50 µl de GRM
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| Placer la plaque à 37°C pendant 30 min. Au sortir de l'étuve
décrire l'aspect des puits et, éventuellement l'aspect d'une goutte de leur culot
observée au microscope.
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Résultats
Tube 1 et tube 3 : sédimentation, hématies intactes
Tube 2 : agglutination des hématies
Tube 4 : hémolyse |
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Informations techniques
| Matériel |
Réactifs |
pour une manipulation
effectuée par les élèves : plaques de microtitration à fond conique, 4 micropipettes,
étuve, microscopes
pour une démonstration : 4 tubes à
hémolyse, pipettes, bain marie, centrifugeuse. Les quantités de réactifs seront
multipliées par 20. La centrifugation accentue la lisibilité des résultats. |
GRM
tampon de Mayer
complément
sérum hémolytique anti GRM |
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