Neutralisation de la streptolysine
par l'antistreptolysineLes streptolysines sont des substances fortement immunogènes (formation
d'antistreptolysine) produites par les streptocoques du groupe A. Elles hémolysent les
hématies de lapin (GRL).
Cette manipulation illustre l'action lytique d'un agent infectieux, le streptocoque, sur
les hématies de l’hôte. La neutralisation de l'antigène (streptolysine) par un
anticorps spécifique (l'antistreptolysine) montre aussi l'intérêt de la formation du
complexe immun. |
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Déroulement de la manipulation
Durée : manipulation 10 min, incubation 30 min, lecture
des résultats 10 min.
A préparer avant le TP
 | Diluer la suspension de GRLapin 10 fois dans du Ringer
(conservation au réfrigérateur).
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| Préparer l'antistreptolysine en dissolvant l'Ac
lyophilisé dans 1 ml d'eau distillée puis en diluant cette solution 50 fois dans du
tampon ASO (conservation au réfrigérateur).
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| Préparer la streptolysine en diluant le contenu d'un flacon
d'Ag dans 3 ml d'eau distillée. (conservation au congélateur possible mais une
utilisation immédiate est préférable).
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| Placer les réactifs (streptolysine et antistreptolysine) à
37 °C à l’étuve.
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| Placer sur la table de l’élève 3 tubes à hémolyse
numérotés de 1 à 3.
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L'activité pratique des élèves
| Mélanger dans le tube 3 0,5 ml de streptolysine et 1
ml d'antistreptolysine.
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| Placer dans le tube 1, 0,5 ml de streptolysine et dans le tube
2, 0,5 ml du mélange issu du tube 3.
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| Ajouter aux tubes 1 et 2 0,2 à 0,5 ml de GRL.
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| Placer les tubes 1 et 2 30 min à 37°C.
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| Si les résultats ne sont pas suffisamment lisibles on peut
soit centrifuger les tubes 1 et 2, 10 min, soit observer la densité des hématies au
microscope fort grossissement.
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Résultats
Tube 1 : hémolyse, obtention après centrifugation d'un
culot blanc de membranes et d'un surnageant rouge d'hémoglobine.
Tube 2 : sédimentation des hématies, obtention après centrifugation d'un culot rouge
d'hématies et d'un surnageant incolore.
Informations techniques
| Matériel |
Réactifs |
Tubes à hémolyse / pipettes 1 ml ou
Plaques de microtitration /micropipettes,
étuve ou bain marie, centrifugeuse.
Dans le cas de l'’utilisation de plaques de microtitration : diviser par 10 les
volumes réactionnels. |
Streptolysine, antistreptolysine, GR lapin, tampon ASO
Tampon ASO : NaH2PO4 1,78g + KH2PO4 3,2g + NaCl 7,4 g + eau 1000 ml (pH 6,6) |
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