Carte restriction

Fiche d’activité n°7 (Saisir et mettre en relation des informations)

Etablir une carte de restriction

On opère une digestion de restriction d’un ADN plasmidique circulaire de 1.6 kb par 2 enzymes EcoR I et Pst I.
Le profil électrophorétique obtenu est le suivant :

1- Déterminer la taille des fragments de restriction observés.

2- On appelle carte de restriction la position des sites de restriction d’une enzyme sur la séquence d’ADN digéré. La carte de restriction EcoR I de l’ADN plasmidique est figurée ci dessous. Construire une carte possible pour l’enzyme Pst I.

Image13.gif (2083 octets)

3- A partir de la double digestion EcoR I + Pst I on a établi la carte de restriction suivante. Pouvez vous la justifier à l’aide des données du profil électrophorétique ?
Quelle stratégie utiliser pour vérifier les hypothèses émises lors de la construction d’une telle carte ?

Réponses attendues

1- EcoR I : 1000+600, Pst I : 800+600+200, EcoR I+Pst I : 500+300+200+100
3- * La bande 500 pb est plus épaisse : on suppose qu’elle correspond à plusieurs fragments d’ADN.
* 1000 EcoRI = 500+500 PstI et 600 EcoRI = 300+200+100 PstI
hypothèse : Pst I coupe les fragments EcoR I 1000 en 2 x 500 et EcoR I 600 en 300+200+100.
D’autres hypothèses sont envisageables. Pour les valider il faudrait utiliser une 3° enzyme afin de confirmer la localisation des coupures (ou des sondes d’hybridation afin de localiser exactement les sites de restriction).